Hoe een eiwit te denatureren

Misschien wil je een eiwit denatureren voor een science-project, of misschien heb je gelezen over gedenatureerd eten en wilt weten hoe dat werkt. Denaturatie is het proces waarbij een eiwit zijn vorm en structuur verliest als gevolg van acties van externe krachten, inclusief warmte, straling, zuren en oplosmiddelen. Organische oplosmiddelen Denature Proteins. De exacte manier waarop u een eiwit duidt, hangt af van de specifieke waarmee u wilt werken, omdat ze allemaal verschillende denaturatiemiddelen op verschillende niveaus vereisen. Het meeste eiwit kan echter worden gedenatureerd, als je weet wat je moet veranderen in de omgeving van de eiwitten.

Stappen

Methode 1 van 2:
Een eiwit denisuring
  1. Titel afbeelding Denature A Eiwit Stap 1
1. Gebruik warmte. Warmte is een van de gemakkelijkste manieren en meest voorkomende manieren om een ​​eiwit te denatureren. Wanneer het proteïne in kwestie aanwezig is in voedsel, zal het koken van het eten de eiwitten nietigeren. Veel eiwitten kunnen worden gedenatureerd door ze bloot te leggen aan een temperatuur van of boven 100 ° C (212 ° F). Hierdoor kunnen de eiwitten het coaguleren en verminderen hun oplosbaarheid.
  • De duur van de belichting is afhankelijk van wat u blootstelt om te verwarmen. Een ei kan bijvoorbeeld in vijf minuten in een pan op mediumwarmte koken, terwijl een gebraden uren duurt om in een oven te koken.
  • Titel afbeelding Denature A Eiwit Stap 2
    2. Alcohol toepassen. Alcohol verstoort de waterstofbruggen die voorkomen tussen amidegroepen van een peptide-binding. Wanneer een eiwit wordt blootgesteld aan een alcoholoplossing, vormen de alcoholmoleculen nieuwe obligaties met de eiwitketen. Gebruik een oplossing van 70% alcohol om door de celwand van bacteriën te breken en het eiwit te denatureren.
  • Geconcentreerde alcoholen kunnen gevaarlijk zijn, omdat ze zowel ontvlambaar als giftig zijn. Draag altijd volledige veiligheidsuitrusting inclusief handschoenen en oogbescherming en handvat in een veilige, temperatuurgestuurde omgeving.
  • Titel afbeelding Denature A-eiwit Stap 3
    3. Verander de pH. De interne structuur van een eiwit kan worden afgebroken wanneer de omgeving zeer zuur of zeer alkalisch is, omdat ze de ionische bindingen verstoren die de zoutbruggen van de eiwit bij elkaar houden. Voeg een zuur- of basisoplossing toe aan het eiwit. De omringende omgeving moet bij een pH van boven de 10 of minder dan 4 zijn om denaturatie aan te moedigen. Als u de verandering met zuur induceert, moet de pH tussen 2 en 5 zijn.
  • Het veranderen van de pH kan een aminozuur ioniseren, afhankelijk van de PKA van elke functionele groep in dat aminozuur. Je kunt ook ioniseren van de aminogroep of carboxylgroep die aanwezig is in het aminozuur.
  • Titel afbeelding Denature A-eiwit Stap 4
    4. Probeer zware metalen zouten. Zware metalen kunnen obligaties in het eiwit verstoren, waardoor het zijn structuur verliest. Zouten van zware metalen zoals kwik en lood kunnen worden gebruikt om verschillende eiwitten te duiden. Dergelijke zouten zijn verkrijgbaar bij de meeste chemische leveranciers, en moeten altijd worden gebruikt met voorzichtigheid en goede veiligheidsuitrusting, waaronder handschoenen en oogbescherming.
  • Zware metalen kunnen interageren met de functionele zijketengroepen van een eiwit om complexen te vormen. Zware metalen oxideren ook de aminozuurzijde kettingen van de eiwit.
    • Methode 2 van 2:
    Renaturerende eiwitten
    1. Titel afbeelding Denature A-eiwit Stap 5
    1. Bepalen of een eiwit kan worden beetogen. Sommige vormen van denaturatie zijn permanent, terwijl anderen ongedaan kunnen worden gemaakt. Het koken van een ei of vlees kan bijvoorbeeld niet ongedaan worden gemaakt, maar een eiwit dat is blootgesteld aan een hoge pH kan de vorm terugkrijgen wanneer deze in een meer neutrale omgeving wordt geplaatst.
    • Of het eiwit al dan niet kan worden beetold, is afhankelijk van zijn DNA. Het DNA houdt de informatie die nodig is voor het eiwit om terug te keren naar de moedertaal.
  • Titel afbeelding Denature A-eiwit Stap 6
    2. Verwijder de denaturerende factor. Breng de omgeving rond het eiwit terug naar Stasis en verwijder het denaturering-element. Verwijder bijvoorbeeld het zuur of de basis, of breng het eiwit terug naar een meer redelijke temperatuur.
  • Titel afbeelding Denature A-eiwit Stap 7
    3. Gebruik een renaturatiekit. Veel laboratoriumbenodigdheden verkopen renaturatiekits waarmee u kunt screenen op de beste parameters om renaturatie aan te moedigen. Dergelijke kits kunnen vooral nuttig zijn als u naar eiwitten in een laboratorium of experimentele instelling kijkt.

    • Tips

    Een gedenatureerd eiwit verliest zijn kwartier, tertiaire en secundaire structuur die duidelijk is in de moedertaal, maar de primaire structuur zal blijven.
  • Een gedenatureerd eiwit verliest ook enkele van zijn bioactiviteit, in sommige gevallen, zoals met enzymen, het verliezen van zijn vermogen om te functioneren. Substraten kunnen bijvoorbeeld niet langer binden aan enzymen die zijn gedenatureerd.
  • Het gedenatureerde eiwit kan zijn oplosbaarheid in een oplossing verliezen.
  • U kunt ook nucleïnezuren denneren met behulp van laboratoriumtechnieken om de strengen te scheiden.
    • Deel in het sociale netwerk:
    Vergelijkbaar